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組織培養スレ
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0604sage
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2018/03/29(木) 20:14:49.89ID:zg57hqVF
寒暖差が激しくてコンタミが怖い季節になったな
0605花咲か名無しさん
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2018/04/01(日) 21:50:20.36ID:t0sfDMlb
今の時期が植物も一番調子いい
連休ごろから猛暑の影におびえる日々が続く
0607花咲か名無しさん
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2018/04/30(月) 23:17:16.79ID:fgBPkAxK
>>606
ほぼ同じじゃないかな。
ヴィトロプランツの方法って、PPMの技術＋京教の薄い次亜塩素酸に、特許を取るために他の薬品を組み合わせた感じが。
農薬のオーソサイドが組織培養に持ち込まれても大丈夫なくらいマイルドなのは目から鱗だったし、色々応用が出来そうだけど。
0608花咲か名無しさん
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2018/05/01(火) 01:46:36.09ID:/TPb3bix
え、PPMとかVipsupporterの主成分ってその辺で売ってる殺菌剤と同じなの？
クリーンベンチ使って真面目に無菌培養してたんだけど、オーソサイド使った手抜きも試してみようかな
0609花咲か名無しさん
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2018/05/01(火) 05:30:23.62ID:pTcRMaPL
どっちもCMIT(クロロメチルイソチアゾリノン)、MIT(メチルイソチアゾリノン)を使った製剤で、
PPMがCMIT 0.1350% (約1.35g/L)、MIT 0.0412% (約0.412g/L)、
vipSupporterがCMIT 1.3g/L、MIT 0.5g/Lなので濃度もほぼ同じ。
他にvipSupporterのほうに硝酸マグネシウム、塩化マグネシウム等 150g/Lとなっているけど、
量は多いものの有効成分ではないと思われる。

メモとして書いておくと殺菌剤のsirViPの成分は、
界面活性剤等 90g/kg、ナタマイシン 400g/kg、キャプタン 356g/kg、オキソリニック酸 4.4g/kgで
1/100程に水で希釈して使用。
界面活性剤はおそらくショ糖脂肪酸エステルのP-1670だと思われ、
キャプタンが農薬のオーソサイド。
ナタマイシンは抗真菌剤、オキソリニック酸が抗生物質（主にグラム陰性細菌に効く）。
0610花咲か名無しさん
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2018/05/01(火) 07:38:03.67ID:9NV8UF38
レスありがとうございます
で、同じ濃度としたならばヴィトロの培地に加えるVipsupporter の量は間違ってない？
説明によるとヴィトロは培地1リットル当たり0.05ml から0.2mlのVipsupporter を入れると書いてある
ところが本家PPM だとリットル辺り0.5mlから2mlとなってる
培地殺菌剤が入ってるとしても薄すぎませんか？
0611花咲か名無しさん
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2018/05/01(火) 10:07:41.21ID:qw7wCR6X
>>610
eViP培地の成分が分からないけど、培地滅菌剤msViP hotには、界面活性剤（おそらくP-1670）、ナタマイシン、オキソリニック酸に加えて、抗グラム陽性細菌剤のナイシンAが入ってる。
一通りの抗菌剤が入っているおかげでCMIT、MITの量は少なめでいいのでは。
同程度入れてしまうとPPMの特許に引っかかる可能性があるという判断もあったかもしれない。
0612花咲か名無しさん
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2018/05/01(火) 22:45:04.49ID:9NV8UF38
>>611
そうするとmsViPを使った方が経済的に思えてきた
培地作成するたびにPPMが1ml近く減っていくのは
あまり気分がいいものではないから

にしても、そのP-1670という界面活性剤も抗菌性があるとは知らなかった
0613花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 00:08:05.78ID:IlSjt011
アルミ蓋の保存ビンで、夏場でも絶対にコンタミしない方法って知りませんか??
0614花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 06:41:05.81ID:bfwdr+FZ
>>613
アルミ蓋ってどういうもの？
0615花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 10:13:45.70ID:C3tYrRzo
ただのジャムビンの蓋です

ネジ式のコメリで売ってるやつです
0616花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 13:47:04.33ID:OLlwDwjk
ジャム瓶で良いんじゃね
気密性が問題なら口に配管用のシールテープ巻いてみたらどうよ
0617花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 14:20:54.64ID:bfwdr+FZ
>>615
それならきちんと扱えばコンタミネーションは起こらないでしょう。
現にジャムが汚染されることは少ないし。

>>616さんが言うようにテープでも巻いとくか、アルミホイルを被せとくとマシかも（実験室の無菌試薬はホコリよけにアルミホイルを被せるのが通例）。
0618花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 15:16:16.07ID:ZUu32cph
いつも夏場に、ジャム瓶で保存していた培地が1割くらいコンタミしていたから心配だったんだけど

両方とも試してみます
0619花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 17:11:38.14ID:ZQMjHZEI
それ、温度変化でで内圧が変わってしまい、外気がフタ近くのホコリ等を吸い込む事で起きる症状です。自分も今手元にある。
だからアルミホイルでカバーしておくだけでも効果あります。
0620花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 17:13:54.75ID:ZQMjHZEI
書き方がちょっと変でした。
フタ付近に積もったホコリ等を含む外気を隙間から吸い込む事でコンタミする
0621花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 21:36:38.57ID:c5OeJVuX
スーパーのジャムが入ってるようなジャム瓶は無菌培養には向かないよ。
ネジ部分が短すぎて、外気が入りやすいからすぐコンタミするでしょ。

研究者は確かに通称「ジャム瓶」というものを使うから、
それを聞いてジャムの瓶を使う人が多いんだろうけど、実際に研究で使うのはジャムを入れる瓶に似てるだけの全然別物。
もっとネジ部分が長くて、樹脂製の蓋を使うから、しっかりねじ込めて密着してコンタミしにくい。
実験用品の通販とかで普通に買えるよ。培養サンプル瓶とかで検索してごらん
0622花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 22:59:44.60ID:B2rUdRrT
配管用のシールテープ勧めた者だけど、こんなの
https://i.imgur.com/jLjRT8H.jpg
雄ネジと雌ネジの間に噛ませて気体の出入りを防ぐ

それかフタの上から自己融着テープを試してみたら良いよ
https://i.imgur.com/U10pS4I.jpg

培養瓶があるなら一番良いが、そこそこで安く済ませたいなら検討してみれ
0623花咲か名無しさん
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2018/05/20(日) 23:30:00.87ID:BFxtgV4s
>>622
前者は滅菌できないし、後者は開けるのに難儀しそう。
外からパラフィルムを巻くか、日本だと何故かどこでも売ってるビニールテープ（絶縁テープ）を巻いとけばいいと思う。

ただ、滅菌後に開けなければ、常識的な蓋から菌は入らないと思われるので、滅菌不足じゃないかな？
開け閉めするならアルミホイルで覆ってホコリを防ぐとかは有効。

培養容器も（酸素や二酸化炭素の）通気を気にしてガチガチに密閉せずに、広口三角フラスコや植物培養用試験管に（蓋をせず）アルミホイルを二、三重にして覆ったり、上から被せるだけのポリプロピレンのキャップを付けるだけのことが多い。
それでも培養中に外から菌が入ることは稀。
組織培養の場合は外植体の殺菌が一番大変。
0624花咲か名無しさん
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2018/05/21(月) 00:36:18.16ID:M3in/C4K
ヴィトロのマニュアルのポリ袋を縛るだけでもそう問題ないのか
あれでも接着不足なシーラーよりマシらしいし
0625花咲か名無しさん
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2018/05/21(月) 06:33:34.49ID:3zwTznjX
ヴィトロプランツの場合は、容器や培地の滅菌が完全ではないので、一定数のコンタミネーションは仕方がないのでは。
また、ヴィトロプランツはビニールハウス等の半屋外での培養も想定しているので密閉についてシビアに言ってる感じ。
0626花咲か名無しさん
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2018/05/27(日) 18:51:46.47ID:mqAgafnH
蘭種子にお茶パックだとかなり外に溢れてしまうのですが、もう少し目の細かくて使いやすいアイテムはありますか??
0627花咲か名無しさん
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2018/05/30(水) 22:55:33.43ID:FR09ggoz
細かい種子だし多少の犠牲はやむを得ないのでは？
それか種を入れた後クリップみたいなもので袋を閉じる
殺菌作業するときは次亜塩素で袋が破れやすくなってし
細かい作業がしにくくなってるのでそれも考えて
0629花咲か名無しさん
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2018/06/04(月) 12:57:35.64ID:iDbTn8O4
コーヒーフィルターに種を入れてホッチキスで留めたら良さそうですね
試してみます
0630花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 11:24:06.40ID:KcvTR/E4
>>623
>>それでも培養中に外から菌が入ることは稀
おいおい。植物培養容器なんて長期培養したらある程度入るのが普通だぞ。嘘を言ってはいけない。
長期培養してほとんど入らないのはシリコン綿栓ぐらいだわ（ゴム栓は蝋封でもしない限り入る）。なんでレトルトの食品があんなにガチガチに密封してると。
モルトン栓とかマヨネーズ瓶とかスカスカだよ。
オマケに長期培養後に入られると見た目でわからなくって、継代で全滅ってナミダ目もアルアル。
気がついてないんじゃなく本当に入ってないなら、それは>>623の上司なり先輩が培養棚をちゃんと管理してるんだわ。

部屋の湿度コントロールしてなかったら、高湿（あるいは温度の上下で結露）時に気がついたら全滅って普通に起こるぞ。
容器伝って入ってくるんだよ。そういうときはパラフィルムなんて気休めにも成らない。
パラフィルムの内側に露が溜まってカビ生えてる。ミリラップ突き破ってくるときもあるしな。
対策としては培養棚（室）は掃除より乾燥、封に気を使うより乾燥。

>>627
遅レスだけど、画材屋でテトロンのメッシュが売ってるよ。
いろんなのがあるから当該ランの種子が漏らない編み目のヤツを買えば使える。
『シルクスクリーン版画用テトロンメッシュ』な。規格は糸何本/inch。300line/inch（2.54cm/300≒85μm四方の編み目）とか。
細かいもの漉すのに少なくともコーヒーフィルタよりは使えるし再利用も容易。
自分はシングルセル培養時に400line/inchのやつを細胞集めるのに使ってた。
新品時はちょい水はじくから裏から布とかで吸い取るとか注射器でとかで吸う必要があるけどね。
0631花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 11:53:27.34ID:Kj3M8kL/
>>630
レトルトは酸化や漏れ防止のために穴が空いていては困る。
一般的な培養では（動物細胞でも植物細胞でも）通気が必要で密閉しないことが多いけどコンタミネーションが頻繁に起こる経験はない。
何にでもカビを生やす人っていて、そういう人がグループにいると頻繁に起こるんだけど、あなたが気になるということは…。
0632花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 19:12:52.07ID:jXr0ZmRi
同じ資材や技術を使っても環境によって差が出ている可能性があるよ
アメリカの大学に行った時、クリーンベンチ外で無菌培養の蓋をササっと開ける程度では全然コンタミしなくて驚いた
カビの胞子が日本より少ないんだろうな
0633花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 19:51:11.85ID:Kj3M8kL/
>>632
日本でも実験室内でさっと開ける程度でカビが入ることは多くないよ。
カビを撒き散らすやつとか、やたら窓を開けるやつとかがいると破綻するけど。
0634花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 21:41:42.26ID:P6dkvj8N
今更だけどシールテープだと滅菌出来ないっていうのが解せん
0635花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 22:00:38.38ID:Kj3M8kL/
>>634
どういう意味？
0636花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 22:13:29.93ID:mU/G2jG/
空気清浄機の風が培養棚に回ってくる状態ならコンタミしにくくなるでいいのか
0638花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 22:25:18.76ID:P6dkvj8N
>>635
シールテープだと滅菌できないって言ってるのが何でなのかわからないって意味
0639花咲か名無しさん
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2018/06/06(水) 22:31:22.86ID:Kj3M8kL/
>>638
たいていオートクレーブ不可じゃないか？

>>636-637
程度によるけどな。
クリーンベンチって空気清浄機付きの箱だし。
0641花咲か名無しさん
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2018/06/24(日) 21:05:48.03ID:5V5kAI//
ランの培養だけど、間違えてH培地1Lにバナナ50gと半分にしてしまったのだが、どのくらい生育違うのだろう。
0642花咲か名無しさん
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2018/06/26(火) 23:47:54.74ID:08RIDMZ/
１日置いて滅菌した液体培地がコンタミで白濁していることに気付いた

そのまま使おうか迷う

固体培地もそのくらいコンタミしているはずだけど見た目全然気にならない

毒素で成功率が下がりそうだ
0643花咲か名無しさん
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2018/06/27(水) 19:39:28.96ID:ibg7sTcS
最強の抗生物質が>>642の培地から発見されるとは
この時誰も気づいていなかったのである
0645630
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2018/08/16(木) 15:37:51.44ID:z9yD2Xf6
>>632
遅レスだけど『培養環境による』。培養棚のほうの環境な。

クリーンベンチとかぶっちゃけコンタミ要因としては低い。
>>633が指摘してる通り『実験室内でさっと開ける程度でカビが入ることは多くない』
つまり作業場所なんて清潔にしてりゃクリーンベンチである必要すら少ないぐらい。

ある知人は『数稼ぐときは夜中の実験室内でやる。コンタミは捨てりゃ良い』と豪語してるぐらい。
普通の実験室つか屋内だと落下菌密度は10個/分/10cm2以下ぐらいだからな。
人の居ない（空気の撹乱が少ない）深夜だとコレがさらに下がる。

湿度が低く温度変化の少ない培養棚ならコンタミこない。逆はコンタミしまくる。
掃除とか隣人がいい加減とかあんま関係ない。
極端な言い方すれば床に培地こぼしてカビ生えまくっててもコンタミしないよ。

理由は温度変化で容器内外のエアフローと微細な隙間への結露が生じること。
で、湿度が高いとコレが激しくなる。そこに微生物が繁殖して中へ入り込む。
温度湿度どっちもコントロールが難しいハウス内でのラン営利培養とかだと、蝋封とか当たり前。
パラフィルムなんてそれこそクソの役に立たない。巻いた隙間にカビ生えてる。
下手したら通気用ミリラップ突き破って菌が侵入する。

『コンタミしたら掃除するより除湿機入れろ』はある程度以上大規模に培養してる人間には常識だと思ってたんだがな？
レス見てると知らないやつ多いんだな。
煽っとけば誰か書いてくれるだろうと思ったんだがそうは行かなかったみたいだ。
まぁ、教科書にも書いてないからなぁ……
0646630
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2018/08/16(木) 15:46:58.33ID:z9yD2Xf6
あ、それからレトルトは酸素遮断～～とか書いてる、勘違いが居るけど、
酸素遮断してないレトルトなんぞいくらでも売ってる。

非常に大雑把に言えばプラフィルムでは酸素遮断は限定的～まったくない。
内側に金属ライナーが貼ってあるやつ以外は大した遮断はしてないよ。
0647花咲か名無しさん
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2018/08/16(木) 18:39:23.65ID:GVPVo+sL
>>646
普通は気密性があるものしかレトルト（食品）と言わないだろ。

>>645
誰もいないなら空いてるクリーンベンチを使えばいい。

何か典型的な知ったかぶりだな。
0648花咲か名無しさん
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2018/08/27(月) 19:31:51.60ID:YnPZYK80
ボンカレーの一番安いのとか酸素通すから日持ちがアルミパックのものより悪いってのは聞いたことある
0650花咲か名無しさん
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2018/08/29(水) 17:18:21.88ID:3QWfqr2o
このテの菌は飽きるまで除去できない可能性があるから厄介
0652花咲か名無しさん
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2018/08/29(水) 17:58:40.21ID:M1iP1uf6
突然長文を書いてマウンティングしたからでは。
文章から知識が中途半端なのがにじみ出ていてイラッとする。
挙句に気密性が必須のレトルトパウチとそうでない真空パックを混同してる。
0653花咲か名無しさん
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2018/08/29(水) 22:41:36.61ID:1e4GKy+S
掲示板ってマスターベーションするための便所じゃないのよね
0656花咲か名無しさん
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2018/08/30(木) 17:29:03.19ID:5A1hPlQH
５ちゃんに書き込んでる時点でマスターベーションな気がするが・・・
0658花咲か名無しさん
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2018/08/31(金) 11:52:40.10ID:2di68pHr
>>657
フタは無理、本体は大丈夫。
何に使うの？
0661花咲か名無しさん
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2018/08/31(金) 13:44:58.59ID:2di68pHr
>>659
ちょっと小さいよ。
どうしても使いたいならNo.6(30ml)かNo.7(50ml)だけど、フタはどうしてもオートクレーブ出来なくてアルミ箔になる。
素直に植物培養用試験管の外径25mmか30mmのリム付き（アルミ箔用）を買ったほうがいいんじゃない？

リムなし植物培養用試験管+（AGC-IWAKIの）植物培養用キャップが一番いいけど、アマゾンでは売ってないね。
アズワンから直接買えるけど。

植物培養用試験管はAGC-IWAKIは入数が多いので、NEGの製品を買う手もある。
直販なら一本ずつから。
0662花咲か名無しさん
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2018/08/31(金) 13:47:57.12ID:2di68pHr
>>660
それは不透明すぎるし形も微妙。
自立型50ml遠沈管のほうが透明度が高い製品も多く形もいい。
オートクレーブ出来るけど、フタと本体は別々にアルミ箔で包んで処理しないと形が歪んで使えなくなることが多い。
0663花咲か名無しさん
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2018/08/31(金) 13:50:53.73ID:da2u6ZwN
>>660
これいいな値段もサイズも良さげ
ただ、中の植物光合成できるかな？
やっぱり中身も覗きたい
0665花咲か名無しさん
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2018/08/31(金) 14:06:52.04ID:2di68pHr
>>664
No.5(20ml)は外径27mmなので無理ではないけど、口が細くなっているので出せなくなるかも。

リム付き培養試験管は上からアルミ箔は二、三重に被せて周りをぎゅっと抑えておく。
リムに引っかかってアルミ箔が外れにくいし、多少外気が入りにくくはなる。
0666花咲か名無しさん
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2018/08/31(金) 15:06:12.80ID:da2u6ZwN
>>665
リム付き結構いいお値段するのね……(´・ω・`)
結論急がずにもう少し勉強して色々探してみるよ
教えてくれてありがとう
0669花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 13:48:18.89ID:ZewscxR2
もう買ったみたいだから参考までに

自分はマヨ瓶タイプ(培養UMサンプル瓶)使ってるよ
・ガラス瓶だから視認性はいいよ
・フタもオートクレーブできるよ
・フタだけ別売りもしてるから、劣化したら買い替えできるよ
・200mlくらいが取り回しやすいよ
https://www.askul.co.jp/p/3754872/
0670花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 14:50:34.47ID:VTHNGB3s
>>657
バイアル瓶の方が良いんじゃない？
シリコンキャップはオートクレーブ（120℃まで？）対応だし
少量検体をたくさん管理するにはとっても良いよ
アルミ蓋はカシメ具が必要だけど
0671花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 21:24:01.63ID:AJ+6nNnr
>>670
ちょうどいい大きさのバイアル瓶ある？？

>>668
うまく行ったらまた書いてね！
0673花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 23:18:11.31ID:VTHNGB3s
>>671
容量はあっても底面積が足りないのよね
でも多品種の組織培養を少量ずつやるには重宝
パラフィルム使わんでも機密性十分だし
シール使っても容器内が陰圧になるとどこかしらから
コンタミするよね
0674花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 23:28:35.25ID:AJ+6nNnr
>>673
コンタミネーションが気になるようなら完全に密閉しちゃえばいいよ。
上の方で書いたかもしれないけど50mLのポリプロピレンの遠心管とか使える。
みんな1個1000円近い容器を買っていて金あるね。
0675花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 23:36:40.14ID:VTHNGB3s
>>674
うん、バイアルはアルミ蓋でカシメるとコンタミしない
アガロースでも懸濁でも使い勝手が良いよ
0676花咲か名無しさん
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2018/09/02(日) 23:39:20.07ID:AJ+6nNnr
>>675
うっかりアガロースって書いちゃってるけど本職の研究者か。
是非、栽培状況とか写真を見せてよ。
何をどう育ててるとかも知りたい！
0678657
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2018/09/09(日) 11:52:42.52ID:Bg5v8MDu
09/05に無菌播種しようと培地作ってオートクレーブ
その日の深夜に札幌大地震発生、それどころじゃなくなる
http://or2.mobi/data/img/210613.jpg
電力復旧して家の中の片付けも一段落ついたから今日無菌播種してみた
培地をマクロ撮影したらアップローダーのエログロ判定に引っかかった(´・ω・`)
ナニと勘違いしたんだろう？(意味深)
種子はDrosera.burmanii
http://or2.mobi/data/img/210611.jpg
http://or2.mobi/data/img/210612.jpg
0680花咲か名無しさん
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2018/09/09(日) 13:12:30.73ID:2sqgteFl
道民だったかお疲れ様。
地震は怖いよね。自分も地震があるたび培養瓶が落ちて割れないか心配になる。

それはそうとこの画像はアカンですよえっちすぎる
0681花咲か名無しさん
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2018/09/09(日) 14:34:21.22ID:x8AyeDBZ
植物培養用試験管とか30mm径くらいまでの自立容器って地震でコケやすいよね。
大阪北部地震でたくさんコケた。
何故か床まで転がらず助かったけど、みなさん気をつけて。
0682657
垢版 |
2018/09/10(月) 12:11:33.43ID:rqUQIgsr
今日は Drosera.stolonifera の無菌播種
種子しか持っていないので、最後の一本以外は一瓶につき一粒という贅沢な置床
球根タイプだからか、昨日のブルマンニーよりも種子が大きくて操作しやすかった
さて、この中からどれだけ生き残れるか……
http://or2.mobi/data/img/210677.jpg
http://or2.mobi/data/img/210678.jpg
ガラス温室に並べるといい感じにラボ感出てきた(´・ω・`)
部屋が消毒薬臭いので雰囲気もある
なお、本震が怖くてガラス戸付けられない模様(｀；ω；´)
http://or2.mobi/data/img/210676.jpg

>>679
>>680
>>681
ありがとう
培養瓶どころかガラス温室まるごと倒れる勢いだったよ
耐震ジェルが温室の足の形に抉り取られてたもん
これなかったら確実に倒壊してた……
http://or2.mobi/data/img/210680.jpg
0683657
垢版 |
2018/09/11(火) 11:34:30.14ID:DnT+ixLi
今日はハエトリの花茎で組織培養してみた
ドナー提供者は先月下旬ホームセンターで死にかけていたやつを救出したもの、あのときの恩を今ここで返してもらうぞ(´・ω・`)
色々ミスってヤバい、片方のボックスなんて培地が固まらず完全に液状化・外植体水没
一度固まったものをオートクレーブにかけただけなんだけどなぁ……
蕾のボックスの方も外植体からなにか培地に染み出してきている、望み薄
おまけに自作クリーンベンチの蓋のロックかけるのを忘れていたことに片付け中に気がついた
コンタミしそう(｀；ω；´)
http://or2.mobi/data/img/210775.jpg
http://or2.mobi/data/img/210776.jpg
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0684657
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2018/09/14(金) 12:42:02.65ID:WQ+Lx8Eh
Drosera.burkeana の無菌播種したんだけどまた培地が固まっていなかった(｀；ω；´)
前回のハエトリと同様にオートクレーブする前は固まっていたのに……
オートクレーブ前に冷蔵庫で冷やしたのが原因か？
幸い種子は大した沈んでいない様子、一先ず全部終わったのであとは結果が出るのを待つだけ
今の所先にやった培養瓶はコンタミしていません
そして、またマクロ撮影したらエログロに引っかかった(´・ω・`)
http://or2.mobi/data/img/210916.jpg
0685花咲か名無しさん
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2018/09/14(金) 13:45:21.22ID:S11lGXqo
>>684
培地が酸性寄りだから寒天のアガロースが、オートクレーブの加熱で加水分解されるんだよ。
回避する方法はあるんだけどコンタミネーションのリスクが増すので、寒天を少し増やしたほうがいいかな。
0686657
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2018/09/14(金) 16:13:24.88ID:WQ+Lx8Eh
>>685
レスありがとう

なるほど、今までは無水クエン酸と重曹でph調整していたから、今度からは加熱溶解後に重曹かキッチンハイター10%水溶液入れればいいのか
オートクレーブ前に測ったphは5.0～6.0ぐらいだったからph6.5から中性ぐらいになるようにしてみる
寒天はすでに10g/L(4g/400ml)だから、これ以上増やすのは根っこ的に難しいかも
あと、1.78気圧で1時間オートクレーブしてるんだけど、時間の長さも関係ある？
0687花咲か名無しさん
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2018/09/14(金) 19:05:41.13ID:S11lGXqo
>>686
培地のpHは5.8あたりが標準では。
きちんと固まるまで寒天を増やせばいいと思うけど。
どうしても嫌なら培地の他の成分と寒天を別々に（半量ずつ水を入れて）オートクレーブして、出したあとに混合して分注するしかない。
当然、その際にコンタミネーションするリスクはあるし正確な分注は難しい。
通常のオートクレーブは2気圧（約120℃）15-20分なので、そんなもんでは。
0688657
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2018/09/14(金) 20:55:44.80ID:WQ+Lx8Eh
>>687
phは中性せず、そのままのほうがいいぽいですね
思い返してみると固まった培地のほうが寒天少なかったんですよね……
この違いはなんだろう

>>678　固まった　寒天8g　固まる前にオートクレーブ
>>682　固まった　寒天8g 固まる前にオートクレーブ
>>683　固まらなかった　寒天10g 固まったあとにオートクレーブ
>>684　固まらなかった　寒天10g 固まったあとにオートクレーブ
0689花咲か名無しさん
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2018/09/15(土) 00:48:33.63ID:BF/FCHA4
固まってからオートクレーブかけたから、
トータルの加熱時間が伸びて寒天の分解が余計に進んだんだと思う。
一度固めてから滅菌するメリットはあまりないと個人的には思ってる。

材料混ぜて、2気圧かけられる圧力鍋で20～30分さっと加熱して放置(滅菌&寒天固めの工程を兼ねる)
ってのが一番時間かからず楽できると思う。
0690花咲か名無しさん
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2018/09/15(土) 00:56:05.64ID:BF/FCHA4
あと、ゲル化剤は寒天よりゲランガムを推したい。
植物が栄養を吸うとゲルが溶けるようになるから、
植物の近くに老廃物がたまりにくくなり、結果として寒天の時よりも多少長持ちする…気がする
※あくまで個人の感想です。
0691657
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2018/09/15(土) 07:52:21.83ID:aESAjNaa
>>689
>>690
そういうことか、今度からは寒天の量を8gに戻してすぐにオートクレーブかけるようにするよ
amazon 、ヨドバシ、yahoo、楽天でゲランガム検索しても化粧品と猫の餌しか出てこない
売っていても高そうだなぁ
色々教えてくれてありがとうね(｀・ω・´)
0692花咲か名無しさん
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2018/09/15(土) 08:29:30.39ID:BF/FCHA4
ゲランガム買うならテックジャムとかかな。個人でも普通の通販サイトみたいに使えるよ。
https://www.tech-jam.com/items/KN3318117.phtml

価格は、使用量が寒天の約半分ってことを考慮しても寒天より割高ではあるけど。
なーに全体の材料費の内訳で考えれば微々たるもんよ(と自分に言い聞かせる)
0693花咲か名無しさん
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2018/09/15(土) 14:30:43.28ID:eWAJtx/+
>>689
私もオートクレーブ前に寒天を溶かさない派だけど、懸濁状態で分注って難しくない？
オートクレーブ後、固まる前に分注してるけど、確実な無菌操作が必要。

>>690
>>691
寒天って品質差が大きくて試薬屋さんのアガーでも固まりにくいものはあるし、食品の寒天粉末を使ってるなら量を増やすか他に買えたほうがいいかも。
0694花咲か名無しさん
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2018/09/15(土) 21:51:44.79ID:fFRrFMIV
>>691
ジェランガム、割高かもしれないけどもヴィトロプランツで売ってます
食虫の種だと1/2～1/6ぐらい培地を薄めて使うので（1/3でも少し濃い）
固まりにくくなるから事前にどの程度で固まるのか試した方がいいです
市販寒天に含まれる塩分がない事やカビた時の判別がしやすい利点がありますよ
0695花咲か名無しさん
垢版 |
2018/09/15(土) 21:58:30.67ID:eWAJtx/+
そうだね。
ヴィトロプランツさんで買ってあげてよ。
0696657
垢版 |
2018/09/19(水) 19:44:48.63ID:qf7CkcbE
>>678のブルマンニーの培養瓶
写真中央の種子の左側より白い何かが出てきた
肉眼でも見づらいので断定できないけどカビかなぁ？
根だと嬉しいが、こういうときの希望的観測は後に自分を傷つけることになる(´・ω・`)
同じ種子の右側にも茶色いものが見えるような、見えないような……

>>692
>>693
>>694
>>695
へぇヴィトロプランツって楽天pay使えるんだ
丁度、楽天カードの初回利用特典のポイントが来月末にもらえるからそれでここから寒天買ってみるよ
ゲランガムはまだちょっと自分には難しそう、寒天でもこの有様だからね(´・ω・`)
みんな教えてくれてありがとう
0698花咲か名無しさん
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2018/09/19(水) 19:52:50.93ID:bDzJoX6N
>>697
いいカメラ持ってるんだからフォーカスをちゃんと合わせてよ。
0700花咲か名無しさん
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2018/09/19(水) 20:53:06.30ID:wCJV7rAP
瓶の中身写すの難しいよな
マニュアルフォーカスを覚えると幸せになれるぞ
0701657
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2018/09/19(水) 21:16:39.30ID:qf7CkcbE
>>700
これ、E-PL3にMINOLTA AF 50mm macro F2.8なのでフルマニュアルです……(´・ω・`)
0702花咲か名無しさん
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2018/09/19(水) 21:23:00.59ID:bDzJoX6N
カビっぽいな。
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